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原虫标本保存

将收集寄生的原虫供长期研究和观察所采取的措施。原虫的寄生部位各异,虫体采集时首先应考虑其寄生部位,收集不同病料,以获得虫体。而采用不同的方法保存。寄生原虫多为单细胞动物。个体小,仅在显微镜下才能观察,因此多制成玻片标本。制作方法见原虫病实验室诊断技术。伊氏锥虫因虫体寄生于血液中,可直接制成血片染色保存。

将收集寄生的原虫供长期研究和观察所采取的措施。

原虫的寄生部位各异,虫体采集时首先应考虑其寄生部位,收集不同病料,以获得虫体。而采用不同的方法保存。寄生原虫多为单细胞动物。个体小,仅在显微镜下才能观察,因此多制成玻片标本。制作方法见原虫病实验室诊断技术

伊氏锥虫因虫体寄生于血液中,可直接制成血片染色保存。如欲保存虫体,则一般可将带虫血液接种于小白鼠的腹腔或皮下,一般2~5天后,即可在其尾尖血中发现锥虫。如此重复继代。

媾疫锥虫可在病马的尿道或阴道刮取物中查到虫体,制成抹片染色后获得标本,如欲保存虫体,可将获得的虫体,接种于雄兔睾丸实质中,1~2周后,家兔的阴囊、阴茎、睾丸、耳及唇发生水肿,并在水肿液中出现大量虫体,可取出水肿液再继代。多次继代后,适应于兔体,即可形成全身性血液感染。

胎儿三毛滴虫的病料除直接检查和动物接种保存外,还可在体外培养。培养基含牛肉浸膏葡萄糖、蛋白胨、琼脂及灭活牛血清、抗菌素等,可将含有虫体的病料接种于培养基中,39℃下培养。3~5天后,虫体在培养基底部生长。

火鸡组织滴虫可用培养的方法或借异刺线虫虫卵保存。培养基含199培养液、鸡胚浸出物、灭活马血清及米淀粉。取可疑病禽肝上的病灶组织或盲肠粘膜组织加入40℃无菌生理盐水,摇匀后,吸取中间层液体,接种到上述培养基中,在38~40℃中培养,12~24小时,即可见到虫体的生长。亦可在病鸡的盲肠中收集异刺线虫,磨碎使体内虫卵逸出,收集虫卵,在27℃温箱中,置21天,待虫卵中幼虫发育后,保存于冰箱中。需用时将虫卵感染幼鸡,该鸡即可发生组织滴虫感染。

巴贝斯虫寄生于病畜的红细胞中,可采血制作抹片。姬氏染色,留待以后对形态的观察。如欲保存活的虫体,可用体外培养繁殖和继代。培养液可用RPMI 1640加汉克氏液(Hank's solution),加入牛血清和抗生素配制。而后将病牛血离心后,取沉淀的红细胞表层接种于上述培养液,在二氧化碳温箱中培养,每日更换上层培养液,间二日在更换上层液体的同时,加入新分离的牛红细胞。通过保存感染有巴贝斯虫的蜱,来保存虫种也是常用的方法。自病畜体表采摘蜱,在实验室条件下,待其产卵并孵化出幼虫。幼虫在外界耐耐受力极强,不需饲喂即可存活达8个月以上,如需取得虫种,可将该幼虫放于切除脾的牛体上,任其吸血,该牛即可感染发病。

泰勒原虫可采血或淋巴穿刺组织做抹片,姬氏染液染色后,留待以后形态观察。如欲保存活的虫体,培养液含下列各成分:①基础盐液;②1%酚红溶液;③2%叶酸溶液;④2%水解乳蛋白溶液;⑤健康犊牛血清。配制时将各液按一定比例混合。培养时可自病牛颈静脉采血,加肝素抗凝。离心后,弃上层血浆,吸取白细胞层,入艾来氏液中混悬,再离心。取其灰白色沉淀,即可将其接种于上述培养基,在38℃温箱中培养。培养增殖后每隔3~4天,换培养液一次,即可继代,长期保存。也可以和巴贝斯虫相仿,通过保存其传播媒介蜱,在需要时让蜱在宿主体吸血,并使宿主发病。

球虫多保存其卵囊。取病畜的粪便,用筛滤及清洗沉淀方法收集卵囊,加入2.5%的重铬酸钾液,在室温中待其孢子形成。孢子形成后的卵囊可在5~20℃的条件下,保有活力达一年之久。

弓形虫可在实验动物中继代保存。最多用的是小鼠。可将含虫病料,注射于小鼠腹腔,初次接种因虫体的适应性常不急性发作,可在20天后剖取小鼠取脾、肺组织,匀浆后再行盲传。如急性发作,则病鼠可有大量腹水,腹水中富含弓形虫的滋养体,此时即可以腹水重复接种于小鼠腹腔,经4~5天即可发病,以此重复继代保存。弓形虫易于在组织培养中继代。多数组织细胞均可做为其饲养细胞。在其中生长良好。

结肠小袋纤毛虫可在人工培养基中生长繁殖。培养基是以灭菌的林格氏液(Ringer's solution)500毫升,加入无菌采取的马(或兔、牛)血清25毫升,分装于试管中,每管8毫升,每管中加入灭菌的米粉一铂耳。培养于37℃温箱中48小时以检查无菌。即可将病料接种其中,37℃培养。虫体将在管底生长。以后每3~4天应重新接种于新培养基传代。

各种病原原虫,在超低温(-196℃)情况下,常能保持其生活能力,待复苏后仍能生存,因此多将虫体保存于液氮罐中,可较长期保存虫种。