指化学物对生物体长期低剂量作用后，所产生的毒性，染毒期限1～2年。在慢性毒性试验条件下，除了需要很长潜伏期或累积作用才能发生的肿瘤影响之外，其他毒性作用都应该表现出来。在合理的试验条件下，应该能测出全部毒性作用，包括神经、生理、生化、血液、免疫和病理方面的影响，同时也观察到毒物对各系统损害的可逆性。在不同剂量作用下及机体出现的不同毒效应的基础上，确定无作用剂量或慢性阈剂量，为制定卫生标准、选择中毒敏感诊断指标和阐明毒作用机制提供依据。

通常采用wistar、sprague dawley和cd.fisher系大鼠，偶而也有使用long-evans或holtzman系大鼠。大鼠的正常寿命长达24个月，而fischer系则更长。一个两年的慢性毒性研究在开始时使用3～4周龄的大鼠，可包括从青春期至老年的整个一生。尽管同系动物在遗传性和环境方面有着共同的基础，但同年龄组大鼠还会出现某些差异，特别是体重。因此，必须随机分配试验组。每个试验组通常使用性别各半的动物。在长期试验研究中，必须考虑某些意外事故，需增添额外的动物。在两年期间，自然耗损能使原来的动物数减少20%。此外，自发性疾病过程也会产生类似化学性损害的变化。这类性质的问题须由统计学来解决，所以在整个试验研究中，还必须准备足够数量的动物。此外，在试验期间，还需定期取一些动物样本进行生物化学和病理组织学检查，观察受试药物对机体损害程度和可逆性的动态变化。因此，每组最终动物数至少每种性别要有50只大鼠。对照组的动物数等于每个染毒组的动物数乘以染毒组组数的平方根。例如每组100只大鼠，共有4个染毒组，则其对照组应有200只大鼠（）。除此之外，还用有谱系记载的狗，例如常选用性器官完全成熟的小猎兔狗（beagle dog）作为评价化学物对卵巢和睾丸的毒性作用。未成年动物不能用作这种评价，因为化学物所抑制的配子形成在组织学上类似性未成熟状态。

可参考亚急性毒性和亚慢性毒性的资料来确定，其中要特别注意受试药物有无蓄积作用。通常所采用的剂量为LD₅₀的1/10、1/50、1/100和1/1000。一般情况下，1/10LD₅₀可引起蓄积中毒，1/100～1/50LD₅₀相当于阈剂量，而1/1000LD₅₀则相当于无作用剂量。如果在亚慢性毒性试验中已经初步估计出阈剂量和无作用剂量，那么在慢性毒性试验中，则可将阈剂量作为最高剂量，并以其1/100作为最低剂量，中间再插入一或两个中间剂量。对照组动物可作相同处理，但不给受试药物，也可以给予溶剂、悬浮剂或空胶囊。有时还可增加一个所谓环境因素对照组，只接触非试验性变异因素，如食物、水及饲养室的条件等。

基本与亚急性毒性和亚慢性毒性试验相同。由于慢性试验期长，除了在试验开始和结束时分别进行检查外，还应在试验期间定期取样检查，以了解各种指标的动态变化和损伤的可逆性。其检查内容可参考下表。

慢性毒性常用检查指标