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植物组织培养

应用无菌操作培养植物的离体器官、组织或细胞,使其在人工控制条件下进行生长和发育的技术。植物组织培养是研究细胞、组织的生长、分化和植物体器官形态建成规律的重要手段。内容主要分以下几方面:愈伤组织培养即植物各种器官或组织增殖而成的细胞团的培养。利用愈伤组织培养,在理论研究上可以阐明植物细胞的全能性和形态发育的可塑性,还可以诱导产生不定芽或胚状体而形成植株。

应用无菌操作培养植物的离体器官、组织或细胞,使其在人工控制条件下进行生长和发育的技术。植物组织培养是研究细胞、组织的生长、分化和植物体器官形态建成规律的重要手段。

内容

主要分以下几方面:

愈伤组织培养

即植物各种器官或组织增殖而成的细胞团的培养。利用愈伤组织培养,在理论研究上可以阐明植物细胞的全能性和形态发育的可塑性,还可以诱导产生不定芽或胚状体而形成植株。

器官培养

主要是指根端、茎尖、叶与未成熟果实等的培养。根端的离体培养是研究生物合成的一种手段,茎尖培养具有快速繁殖和去除病毒的优点。

胚培养

主要是对比较小且未成熟的胚进行培养,研究胚胎发生以及影响胚生长的因素,特别是所需要的有机营养成分的研究。

胚珠和子房培养

培养已传粉或未传粉的子房及胚珠,是进行试管受精和诱导单倍体植株的一个途径,也是研究生殖生理的有用方法。

胚乳培养

是研究胚乳的功能、胚乳与胚的关系以及获得无籽结实的三倍体植株的手段。

花粉和花药培养

利用花粉具有单套染色体的特点,诱导产生单倍体植株进行育种,可以缩短育种周期获得纯系。

细胞培养

分散性的离体细胞或细胞团的悬浮培养,可应用于生产,提取某些有用成分和次生物质,单细胞培养还可用于取得单细胞无性系,进行突变体选育。

原生质体培养

将去壁后裸露的原生质体进行培养,它易于摄取外来的遗传物质、细胞器以及病毒、细菌等,应用于体细胞杂交研究上。

意义

组织培养为研究植物细胞、组织生长分化以及器官形态建成的规律创造了实验条件,有力地推动了生物科学中植物生理学生物化学遗传学细胞学、形态学,以及农林、医药方面等各门学科的发展和相互渗透,促进了营养生理、细胞生理和代谢、生物合成、基因重组的研究,同时带来了新技术的发展。在实践上,组织培养已表现了巨大的潜力:①在育种工作上,加速无性或有性世代的繁殖,缩短育种期限或获得新的基因型,克服远缘杂交不亲和的障碍,促进幼胚发育和获得三倍体植株等;②利用超低温保存器官或细胞,当环境适宜时,又可使其恢复生长和分化,这种技术处理有利于珍稀濒危植物资源种质的保存和利用;③用于药用成分的生产和生物转化,发掘新的、具生理活性的化合物,在工厂化生产和医药事业上有广阔的前景。

一般技术

组织培养实验室的最主要的设备条件是无菌操作室或超净工作台(或无菌接种箱),配制培养基的实验室和恒温培养室,配以加压消毒锅及常用的玻璃器皿、用具和仪器设备(如显微镜)等。组织培养的操作程序大致可以归纳如下。

器皿、用具的洗涤和消毒

玻璃器皿用洗衣粉刷洗干净或放在洗涤液中浸泡,冲洗干净备用;工作服经加压高温消毒,其他用具高温消毒;无菌操作室和工作台经新洁尔灭或70%酒精擦洗、紫外光灯照射后使用。

材料的灭菌

各种植物材料使用的灭菌剂种类及灭菌剂的浓度、处理时间不尽相同,常用的有乙醇、过氧化氢、漂白粉、氯化亚汞等。

培养基的配制和选择

植物材料在异养条件下,除必要的矿质营养物外,还必须供给作为能源的碳水化合物、微量的维生素和激素。此外,有时还需要某些有机氮化合物、有机酸和成分复杂的天然物质,若使用固体培养基则需加入琼脂。不同植物材料所适用的培养基是不同的,可以参考前人现成的配方加以修改,或进行多种配方和配比试验,选出最适培养基。目前所使用的培养基以MS培养基居多,这是由于它含有较高浓度的NO3-、K、NH4,对一般植物组织和细胞有促进生长的作用,其他如Nitsch、B5、W、H等培养基也适用于多种材料(培养基配方从略)。

接种

在无菌操作下,切下所需培养的部位。以微生物接种方法把材料置于经高温高压灭菌过的培养基上。常用的培养基盛器有三角瓶、试管等。

培养

培养的条件主要为温度和光线,一般最适温度是25~28℃,光照是根据培养物的需要而异,茎或芽的发生需要良好的光照,强度为300~1000勒克司。细胞液体悬浮培养时,尚需有通气装置。

研究成果

自20世纪初提出植物细胞具有全能性,可以经过体外培养成为一棵完整植株的设想后,在20~30年代期间,一些学者的工作为组织培养技术奠定了基础。40年代以后,在控制组织和细胞分化的研究上有很大突破,发现了腺嘌呤、生长素的比例是控制芽和根形成的重要条件;激动素、生长素的比例对器官发生有调控作用。同时,胚状体培养成功,建立了液体悬浮培养程序等。60年代以后花药培养、离体受精原生质体培养、细胞杂交等都陆续取得了一系列的研究成果。当前,组织培养作为生物工程一项重要技术,在基础理论研究和生产实践上正发挥巨大的作用。中国对组织培养工作的研究作出了重大贡献,特别是在胚胎培养和利用花药和花粉培养技术诱导单倍体的研究中,培育了烟草、水稻、小麦新品种,其中有的已用于大面积生产;蔬菜中的辣椒、番茄等,果树中的葡萄,苹果、柑橘等都培育出花粉植株,为育种开辟了途径。原生质体培养和细胞杂交,越来越受到国内外人们的重视。烟草、矮牵牛等十几种植物已得到了再生植株,有的还得到了体细胞种间杂种或属间杂种。木本植物檀香经悬浮细胞培养成再生植株已见报道。总的看来,虽然原生质体融合方面成功的例子还不多,但前景是美好的。在医药工业上,使细胞和组织培养物成为药物的来源已成为事实,近年来日本大量培养人参细胞,并提取其有效成分;德国培养洋地黄生产强心甙并进行生物转化,取得疗效高、毒性低的强心甙等。利用细胞培养可以筛选高含量有效成分的突变体,应用发酵技术进行工厂化生产。细胞和组织培养是生物工程中一项重要的技术,是“绿色革命”的一个重要部分,在充分利用丰富的植物资源,改造植物造福于人类方面它具有很大的潜力。