登录| 注册    
收藏  点赞 

显微操作技术

用分离卵裂球的方法,研究每个细胞之间的相互作用,以此来阐明早期胚胎发育问题。显微操作技术用于哺乳动物早期胚胎发育的研究开始于20世纪30年代,尼柯拉斯(J.S.Nicholas)1933年将大鼠2细胞胚分离开,将每个卵裂球移植到肾囊内,以观察其发育情况。随后,品克斯(G.Pincus)1936年将2细胞兔胚的两个卵裂球分离后移植于假孕母兔,结果发育成两个体积较小的囊胚。

利用显微操作仪对微小物体进行精细处理的技术。它应用于分离单个细胞,分割早期胚胎、向组织或细胞中注入某种物质、切除部分癌细胞、测定活细胞数量等生物学和医学研究;它也可用于非生物学的研究,如晶体管生产、集成电路制作,最精密的标尺和钻孔器的生产、原材料显微结构的研究。金属屑和光子物质或光电物质的研究以及金属沉淀的微量分析等。该技术在动物学方面的应用,已有100年的历史,早期在无脊惟动物和低等脊椎动物上,用分离卵裂球的方法,研究每个细胞之间的相互作用,以此来阐明早期胚胎发育问题。显微操作技术用于哺乳动物早期胚胎发育的研究开始于20世纪30年代,尼柯拉斯(J.S.Nicholas)1933年将大鼠2细胞胚分离开,将每个卵裂球移植到肾囊内,以观察其发育情况。随后,品克斯(G.Pincus)1936年将2细胞兔胚的两个卵裂球分离后移植于假孕母兔,结果发育成两个体积较小的囊胚。尼柯拉斯等(1942年)在同样的实验中,证明2细胞大鼠胚的单个卵裂球具有形成完整胎儿的能力。至50年代,西得尔(G.E.Seidel)1952年和塔柯夫斯基(A.K.Tarkowski)1959年用该技术进一步证实了以上的结果,并分别获得活的仔兔和小鼠。随着胚胎技术的深入发展,显微操作技术已广泛应用于同卵多生、胚胎融合、核置换、胚胎早期性别鉴定和基因导入等多种研究。

菜兹(Leitz)显微操作仪结构图

显微操作仪的结构

莱兹(Leitz)显微操作仪包括一台Leitz Laborlux-2型显微镜(或大视野立体显微镜)和左、右两个机械手,均安装在一大块底座上,另外,还有一套显微注射装置,根据需要,可安装在显微镜的左侧或右侧(见图)。

机械手

由一系列操纵装置构成的人手延长的器械。包括以下构件:①左右向移动显微器械的粗调节轮;②前后向移动显微器械的粗调节轮;③机械手上部倾斜度调节轮;④垂直向移动显微器械的粗、细调节轮;⑤机械手微调装置;⑥支架装置。

微调装置

由一个手柄和一个滑轨机构组成。转动手柄可微细地调节机械手,使其在平面位置的两个坐标内移动。调节变化率可使支架臂位置在1/16至1/800内连续变动。手柄的移动叮通过滑轨和球形关节传至显微器械。例如,手柄从“0”移至“0'”,滑轨的中心位置则从Z2移至Z2',移动距离=a,同时,滑轨的球状面相应地将支座推移距离a'(a'=a),从而使支架和显微器械也移动同样的位置。

支架装置

支持显微器械的装置。由支架、球形关节和支座构成,并固定在纵向粗调吻合轨道上。支架有单杆和双杆两种,连接管镶嵌在支架槽内。接管头端安插显微器械,后端叮连显微注射装置。

显微注射装置

包括注射器及其支架两部分。注射器连接一个三通接头,与乳胶管相连。使用时,注射器活塞的压力是经过一个不可压缩的媒介液(水或液体石蜡)传向显微吸管的。

显微镜的特殊装置

即微调机构。包括前、后滑轮和传动皮带。将皮带装入显微镜右侧上、下两个微调节轮的滑轮槽内,并将其拉紧即可使用。

操作的主要步骤和注意事项

①开始,把机械手的调节装置均调在基础位置上,微调手柄呈垂直状,变化率放在中等范围(两个黑色记号之间),使机械手上盖与镜台处于同一水平面。②调整光学系统后再安装支架装置和显微器械,注意球状关节必须置于水平状态。③调节支架的垂直向粗调吻合轨道、球状关节和各种机械手的调节轮,使显微机械确保在显微镜视野的中央,并能运转自如而不与镜台碰撞。④调整手柄的变化率,使适合于物体的特性和显微镜的放大倍数。⑤放置培养皿或载物片时,应先将显微器械移出视野,待物体焦距清晰后,再将它移入视野,并垂直调节使物体与显微器械的头端在同一焦距平面上。⑥使用显微机械时,要不停地用手柄和垂直调节轮调节,以保证正常运行。