花药是二倍体细胞和单倍体细胞的混合群体。因此,如果花粉壁再生,或成团的小孢子融合在一起,用花药培养就难于得到单倍体。为了克服这个困难,离体小孢子培养技术已成功地用于一些物种中。Binding13把矮牵牛的花药在营养液中压碎,用160μm网眼的不锈钢筛过滤并把离体花粉粒培养在加有0.6%v/v琼脂的培养皿中。Sharp等人188对食用石松的花粉施行一种看护培养技术,14天后则看到增殖现象。花粉看护培养在于把圆形滤纸表面的少量离体小孢子置于完整花药或增殖愈伤组织团块上进行培养。Pelletier166应用类似的方法在矮牵牛的滋养组织上使烟草