以系列稀释液中细菌出现机率测定微生物生理群数量的方法。简称MPN法，又称稀释频度法。是将不同稀释度土壤悬液分别定量接种于多次重复的培养管中，培养若干时间后目测或以特定生化反应，检测有无细菌生长，由此得出数量指标，再查对经概率统计的稀释测数统计表（Me Crady表）计算单位重量土壤中微生物数量，此法常用于一些生长缓慢、功能特异的生理群，如硝化细菌、嫌气固氮菌、硫化细菌、反硫化细菌和纤维分解菌等。

系列稀释待测液的每一稀释液（稀释倍数为a），多次重复（n）地接种于培养管（总管数为S）培育一定时间后，由于待测菌呈非均匀分布，往往出现重复管间有的管中生长菌，有的则无菌；生长菌的管中含菌数亦不尽相等，因此，需用概率统计法计算。马瑟（Mather）曾用最大概率方程求解，以达到最准确估计任何稀释度中每管的微生物数。如在S管中有菌生长的总管数为X，或无菌的为Y，设λ是最高浓度下每管的微生物数，则无菌生长的数学预期值Y可用方程式Y＝n（e^-λ＋e^-x/∂＋e^-λ/∂2＋…＋e^-λ/∂s-1）表示，并可知所有浓度下生长菌的平均管数，X＝，不生长菌的平均管数Y＝S—X（或Y＝-X）。由X、Y查出相应的表值常数K，在这

些参数间的数学关系式为：logλ＝Xloga-K。由此不难求出λ值，并可进一步求得每克样品的含菌量。在此基础上MeCrady发展了稀释测数统计表，据之查出不同重复下的近似值，更便于计算。

①制备系列稀释液（见稀释平板法）。在含菌量少的情况下也可用2倍稀释法）；②稀释液接种于培养液，根据各类群微生物在土壤中的大概数量选择5个连续的稀释度，将其分别接种至含有5～10毫升适合待测菌的选择性培养基试管中。注意用同一支吸管接种同一样品不同稀释度的悬液于试管时，应从高稀释度开始，然后依次接种较低稀释度的悬液。每管接种悬液1毫升，每一稀释度重复接种3～5管。③培养取得数量指标，于28℃培养7～14天，观察各稀释系列试管中有无待测菌生长（或测试有无其生化反应），分别记载结果得出数量指标，即取稀释系列中所有重复管都有菌生长（或生化反应为正者）的最高稀释度为数量指标的第1位数字，再取两个连续的数即可。注意应用此法时，在稀释系列中必须最后一个稀释度所有重复间都没有待测微生物生长。④计算，根据所采用的重复数和数量指标，在相应的稀释法测数统计表（即MeCrady表）中查出细菌近似值。以近似值乘以稀释倍数再除以干土百分数，即是1克干土中的菌数。

试验为5次重复者

附表

其数量指标为542，由5次重复的MeCrady表查出近似值为25，据此计算每克干土中菌数：

最大概率数法

如果在所有重复试管内都有微生物生长的稀释度之后，仍有三个数字时，则将最后一个数字加到前一个数字上，例如：

附表

数量指标为544，由表查出近似值为35，稀释倍数应为10。此例中每克干土菌数：

最大概率数法