评估农药防治病害的效果及其应用价值的试验方法。药效测定的内容包括药剂防治的对象、对病原物的毒力、防治原理、施药技术、残效期、农药理化性能及其加工剂型与药效的关系。以防病效应评估各种药剂的差异和实用价值。此外，可测定对植物的药害和对非靶标生物群落的副作用。药效测定首先采用室内快速简便方法筛选出有希望的药剂再进行温室盆栽植株测定，最后在不同生态环境条件下进行大田药效测定。以对病原物产生50%效应的有效浓度（EC₅₀）或产生100%效应的最低抑制浓度（MIC）值与对照标准药剂产生相同效应的浓度之比，评价测定药剂效力和推广价值。

又称毒力测定，对病菌或培养基质施以药剂，以孢子萌发率、菌体生长速率、菌体形态或呼吸作用等生理变化作为衡量药剂毒力的指标。根据药剂和供试病菌的特性，室内药效测定方法如下。

孢子萌发法

将药剂附着在载玻片或其它适当平面上，然后滴上病菌孢子悬浮液，或使药液直接与孢子液混合，适当培养后镜检孢子萌发率。药剂浓度对数与抑制孢子萌发机率值之间的函数关系，以剂量反应曲线（简称D-R曲线）表示，并可根据D-R曲线位置和斜率评估和比较药剂毒力。

生长速率测定法

在含有药剂系列浓度的固体培养基平板上或液体培养基中，定量接种，经适当培养后，测量和比较菌落扩展速度、或浑浊度或菌体干重增加速率。有的可通过测量菌体分泌、代谢物含量推测对菌体生长速率的抑制效力。适用于近代开发的许多对孢子萌发无抑制作用，但可干扰菌体生物合成或细胞分裂过程的药剂的药效测定。

附着法

细菌或真菌孢子附着在灭菌的种子、菌丝、果皮或其它保护材料上，直接接触药剂，并给予适当温度、养分和水分，一定时间后观察有无菌落形成。

气体效力测定法

有些杀菌剂能够挥发或分解产生具有抗菌效力的气体。测定气体抗菌效力是在固定的培养基上接种供试菌，将皿倒置，在倒置皿盖内放入药剂，检查经培养的病菌生长发育状况。

扩散法

又称抑菌圈法，在已接菌的固体培养基平板上，加入少量抗菌物质，使药剂接触培养基和病原菌，适当培养后施加药剂部分的培养基周围由于药剂扩散产生抑菌圈或抑菌带，抑菌圈的大小与药剂浓度呈函数关系。应用此法比较杀菌剂毒力大小或病原菌对药剂的敏感性时，还应注意抑菌圈大小受不同药剂在培养基中水平扩展能力的影响。扩散法常用于农用抗菌素和混配药剂的药效测定。

形态观察法

有些杀菌剂对孢子萌发和菌体生长速率几乎没有抑制作用，但影响菌体正常形态，阻止病菌侵染发病。如水稻纹枯病菌接触井岗霉素后，菌体新分枝细胞缩短、分枝角度增大。多菌灵处理真菌孢子后，孢子能正常萌发，但芽管不能形成隔膜，三唑酮可使菌丝顶端肿涨畸形。

室内活体测定法

对新发展的少数只在寄主活体上才表现抗菌活性的药剂和对专性寄生菌的药效测定，可用药剂处理果实或部分植株组织如叶段、叶碟，经培养后以早期菌落扩展速率或寄主发病程度、或病菌在寄主上的繁殖率评估药剂效力。

经室内试验证明药效较好的药剂，必须直接在植株上进行试验，测定药剂与寄主相互作用下的防病效果。温室试验一般在幼苗上试验，不受季节限制，通过适当仪器将药剂定量均匀喷施到盆栽植物上并定量人工接种，模拟发病的最适条件确保对照植株发病，使在较短时间内能得到重复性稳定的试验结果。试验内容和要求与大田药效试验类似。

对多种农药新品种或当地未曾使用过的农药药效比较试验，以及同一药剂中不同加工剂型，施药方法、施药剂量、施药浓度、施药时间和次数的比较试验等。各试验中应注意作物对药剂的反应，如药害或促进作物生长发育等。田间试验步骤可分为小区、大区和大面积示范试验，取得经验后进行推广使用。小区试验面积大小可根据土地条件、作物种类、病害特征和试验要求而定，一般不小于20平方米，成年果树不少于3棵，设3～4次重复和保护行。大区试验面积一般在0.5～2亩，不设重复或重复1次。大面积示范试验是在药剂经小区和大区试验并肯定了药效和经济效益的基础上进一步在不同生态区域进行试验，以肯定其推广价值。

大田药效试验方法随药剂特性、防治对象和试验目的而异。常见的施药方法有喷施、种苗处理、土壤处理、果实处理和烟熏等。混配制剂的药效试验中，除设对照标准药剂处理外，还应包括混配制剂中各成份的单剂处理，根据防治效果评估药剂复配后的联合作用模型。病菌侵染后施药或根部施药防治地上部分的气传病害，可测定药剂内吸治疗效力、分析药剂在植物体内的输导方式和重新分配。

杀菌剂残效期受药剂理化性能、寄主和病原物代谢降解或环境温度、光照、雨水冲刷等因素的影响。残效期测定常采用生物测定的方法，也可采用化学和仪器分析的方法。如比较施药后不同天数接种对病害的防效，可用扩散法直接测定寄主体液的抗菌能力。施药后间隔取样萃取药剂有效成分，可通过气相、高效液相色谱或紫外光谱等方法定性定量分析，直接测定药剂的有效残留量。如经乙酸乙酯萃取作物体内的多菌灵有效成分，可用色谱和紫外光谱分析残留含量。分析环境单因子对药剂残效期的影响可在室内进行模拟试验，通过上述方法测定。