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病原物保存

分离纯化后的病原物应在代谢活动最低的条件下保存,以延长其生命并保持原有性状。不同种类病原物的保存或贮藏方法虽有差别,但都要求尽可能延长其存活期,且不引起性状的改变。通常采用的措施有减少营养成分,降低温度和湿度,隔绝氧气等。从贮藏期的温度来分保存方法有室温(10~20℃),低温(0~-20℃)和超低温(-60~-196℃)保存等,温度愈低,存活期愈久。一些真菌菌丝(如腐霉

分离纯化后的病原物应在代谢活动最低的条件下保存,以延长其生命并保持原有性状。不同种类病原物的保存或贮藏方法虽有差别,但都要求尽可能延长其存活期,且不引起性状的改变。通常采用的措施有减少营养成分,降低温度和湿度,隔绝氧气等。从贮藏期的温度来分保存方法有室温(10~20℃),低温(0~-20℃)和超低温(-60~-196℃)保存等,温度愈低,存活期愈久。一些真菌菌丝(如腐霉,疫霉)0℃以下易冻死,通常在5~10℃中保存。贮藏期的湿度若在室温下贮藏要求较高的湿度,低温下贮藏要求尽可能的干燥。充足的氧气有利于病原物的生长,不利于菌种保存或贮藏,因此最好在真空条件下贮藏。通常采用的病原物菌种保存方法如下:

斜面培养保存

许多真菌,放线菌和细菌的斜面培养,在室温条件下,可以保持生活力达1~3个月。要求清洁无尘无螨的玻璃橱,每隔2~3个月重新移植一次。但经常移植,病原菌一直处在生长状态。有些性状易发生变异,最常见的如致病力的丧失或减弱。降低培养基中碳源和氮源的含量,可减少或延缓病菌性状的变异。在斜面上注入灭菌水或灭菌的矿物油(液体石蜡)隔绝菌体与氧气的接触,可有效地抑制病原物的新陈代谢,在冰箱中贮存,可保存1~2年。

灭菌水中保存

多数细菌,尤其是假单胞菌和欧文氏菌,可以在灭菌的15%甘油或水溶液中存活较长,一些真菌的菌丝或孢子,在水液中存活的时间长达几个月。这些病原物的纯培养可置于灭菌水中保存。

干燥保存

真菌和放线菌的孢子或菌丝体混合在颗粒很细的灭菌土壤或河砂中,完全干燥后密封保存。细菌用脱脂牛乳配制成悬浮液,或与灭菌后经冰冻处理的硅胶颗粒(6~20目)混合,干燥后放在具螺盖的试管中,在低温下保存,复苏时只要取出几粒硅胶放在培养基平板上即可长出菌落。

冷冻真空干燥保存

病原物细胞经常规冷冻处理时,在细胞内形成冰的结晶,随着细胞内电解质浓度的升高,蛋白质和核糖核酸均会失水而变性,使细胞活性受损。快速冷冻干燥是使病原物细胞迅速冷冻,通过减压,细胞内水分升华而快速失水,病原物细胞不受损害。真菌的孢子或细菌细胞放在血清或脱脂牛乳等保护剂中,置安瓿瓶内经真空干燥后密封,在低温冰箱内一般可保存5~10年。冷冻真空干燥是当前各国普遍采用的一种菌种保存方法。

液氮保存

病原物经预冷(-40℃)处理几小时后移放在液氮中,可以较长久地保存,液态氮的温度为-176~-196℃。一些不宜经常移植或反复冻融的真菌和细菌,在液氮中保存既安全又方便。

病毒标样的干燥保存

大多数植物病毒经纯化后接种在繁殖寄主上,发病后采集病叶剪碎,铺放在垫有硅胶或无水氯化钙作干燥剂的培养器中,先在低温下经3~4天干燥后再放在两端盛有干燥剂(硅胶颗粒)的指形管中,密封后在低温冰箱中,可保存病毒的活性达5~10年。

活体保存

所有的专性寄生物,目前只能接种在寄主植物活体上保存。有些高大寄主或木本植物较难培养保存,可接种在试管苗或组织培养的材料上保存。

保存机构

为了研究需要又便于学术交流,各国都设有专门保存菌种和微生物或病原物的机构。在中国,病原真菌、病原细菌和病毒的保存中心是中国科学院微生物研究所,病毒的另一个保存中心是在武汉大学的病毒研究所。有条件的农业院校和科研机构也保存很多病原物的菌种。在国际上,比较有名的如美国模式菌种保藏委员会(ATCC,USA),英国典型菌种收藏所(NCPPB,UK),日本东京大学应用微生物学研究所(IAM,Japan),法国标准微生物收藏中心(CCTM,Lille)和巴斯德研究所(IPL,France),新西兰菌种保藏所(PDDCC,New Zealand),荷兰的真菌菌种收藏中心(CBS,Netherland),俄罗斯微生物收藏馆(INMI,Moskow)等。