测定抗体的中和活性及病毒、毒素类型的试验。病毒与相应的中和抗体结合后，能使病毒失去吸附细胞的能力或抑制其侵入和复制，从而丧失其感染力；抗毒素与毒素结合后，能抑制毒素β亚单位与易感细胞的受体结合，从而使有毒性的A亚单位不能进入细胞而失去毒性作用。该试验不仅有种、型的特异性，而且还表现在量的关系，即一定量的病毒（或毒素）必须有一定量的中和抗体才能被中和。

该试验以病毒对宿主细胞的毒力为基础，故应根据病毒特性选择合适的实验动物、鸡胚或组织培养，测定病毒的滴度。

滴度的单位目前多采用半数致死量（LD₅₀）或半数感染量（ID₅₀），即能使实验动物或鸡胚半数死亡或细胞培养半数发生感染的剂量，通常用终点法滴定。单位名称应标明所用材料，如鸡胚半数致死量（ELD₅₀）、鸡胚半数感染量（EID₅₀）和细胞培养半数感染量（TCID₅₀）等。测定时将病毒按对数稀释，分组接种，观察在指定时间内死亡、发病或出现细胞病变的数量，最后按里德—明奇（Reed-Muench）或卡伯（Karber）法计算半数剂量。以卡伯法较为简单，其公式为：

LD₅₀＝L＋d(S-0.5)

半数剂量用对数计算，L为病毒最低稀释度的对数，d为组距，即稀释系数，S为死亡比值的和。例如微量法滴定某病毒材料的TCID₅₀时，病毒用：10^-4，10^-5，10^-6，10^-8等4个稀释度，每组接种6孔细胞，观察结果。各组出现细胞病变（CPE）比值为：6/6、5/6、2/6和0/6，则L＝-4，d＝-1，S＝6/6＋5/6＋2/6＋0/6＝2.16。

TCID₅₀＝-4＋(-1)×(2.16-0.5)＝-5.66

半数剂量可以用负对数表示，即该病毒的TCID₅₀为5.66，但这个数不能表明剂量，故多将其还原成10^-5.66，即1/10^5.66稀释的病毒能使半数细胞孔出现CPE。如用细胞培养瓶作试验，则尚需标明接种剂量，如每瓶0.1毫升，则该病毒半数剂量为10^-5.66，0.1毫升。

病毒滴度以每毫升（或克）含多少LD₅₀（或TCID₅₀）表示，上例病毒滴度为10^5.66TCID₅₀/毫升或1₀⁵⁶⁶/₀.1毫升。

有两种基本方法。

固定病毒稀释血清法

将病毒稀释成每一接种单位含200LD₅₀（或EID₅₀、TCID₅₀），与等量二倍递进稀释的待检血清混合，置37℃1小时，分组接种，记录各组的保护数，按半数剂量计算法计算其半数保护量（PD₅₀），即该血清的中和价。以卡伯法计算时，S应为保护比值的和。

固定血清稀释病毒法

将病毒按对数稀释，分装两列无菌试管，第一列加正常血清（试验组），第二列加待检血清（中和组），置37℃1小时，分组接种，记录各组死亡或感染数，分别计算对照组和中和组的LD₅₀（或EID₅₀、TCID₅₀），按下式计算中和指数。

中和试验

病毒中和试验不仅用于抗血清的效价滴定，还广泛用于病毒种、型和亚型的鉴定和病毒保护性抗原的分析（用单克隆抗体作中和试验）。

基本方法同病毒中和试验，主要用于毒素和抗毒素的单位滴定，也可用絮状沉淀反应滴定，称为絮状单位（Lf）。

中和试验的结果只能反映体液免疫状态，不适用于细胞免疫水平的测定。