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荧光素标记抗体

荧光色素与抗体共价结合的生物制品。简称荧光抗体。将荧光素标记于抗体上,揭示特异性抗原的存在,用免疫荧光试验观察抗原抗体反应,诊断家畜传染病。库恩(A.H.Coons)等在1941年发表了有关荧光素标记于抗体的首篇报道。库恩和卡普蓝(M.H.Kaplan)二氏(1950)提出应用荧光抗体技术能够直接观察到抗体抗原反应,可以准确地定位。此后,荧光抗体技术得到了广泛应用。

荧光色素与抗体共价结合的生物制品。简称荧光抗体。将荧光素标记于抗体上,揭示特异性抗原的存在,用免疫荧光试验观察抗原抗体反应,诊断家畜传染病。库恩(A.H.Coons)等在1941年发表了有关荧光素标记于抗体的首篇报道。库恩和卡普蓝(M.H.Kaplan)二氏(1950)提出应用荧光抗体技术能够直接观察到抗体抗原反应,可以准确地定位。此后,荧光抗体技术得到了广泛应用。

常用的荧光素有异硫氰酸盐和若丹明。荧光抗体既保持了抗体的活性,又具有荧光素活性。在体外与相应的抗原相遇时,荧光抗体与抗原发生特异性反应,在荧光显微镜的紫外线激发下,标记抗体上的荧光素发出荧光,由此可以测知抗原的存在及其存在的部位,荧光的强弱反映了抗原存在的多寡。

抗体制备

制备荧光抗体要用高价免疫血清。抗体效价不论抗球蛋白的效价或抗病毒的效价均须达到规定以上。检查组织细胞中的特异抗原,须去除血清中不需要的抗体。为了获得纯化的抗体,丙种球蛋白常用硫酸铵三次沉淀法制得。IgG用DEAE-cellulose离子交换剂洗除。经过鉴定后备用。

标记方法

有FITC法和罗丹明类荧光色素法两种。

FITC法

包括:①搅拌法。按与抗体蛋白的重量比,秤取FITC无定型粉末或结晶紫粉末,用碳酸盐缓冲液溶解。将粗制球蛋白或纯化IgG用碳酸盐缓冲液稀释盛于三角瓶,加磁棒固定在电磁搅拌器上,4℃条件下边搅拌边加入FITC液,以缓冲液补充至蛋白最终浓度,隔日取出,去除游离荧光素。②透析法。将配制好的FITC液盛于容器内,将装有欲标记抗体的透析袋浸没于FITC溶液内,放入搅拌棒,置电磁搅拌器上在4℃条件下搅拌透析,隔夜取出透析袋中的抗体,去除游离荧光素。

罗丹明类荧光素法

包括TMRITC法标记和RB200标记。标记后的抗体经纯化和计算F/P比值,鉴定证明无游离荧光素,有足够的抗体含量及适宜的F/P比值,抗体活性不降低,不含非需要的抗体,即为合格的荧光标记抗体。

贮存

合格的荧光抗体,加万分之一硫柳汞或0.1%叠氮化钠防腐,分装于安瓿内熔封,于4℃可保存1年,-20℃保存2年。冷冻真空干燥后,于4℃可保存5年。