体外检测动物外周血淋巴细胞膜上表面受体的方法。简称花环试验。在外周血液中,T细胞、B细胞和K细胞膜上均具有一种不同的表面受体,据此可以相互区别,并对T细胞和B细胞进行定量检测。 T、B、K淋巴细胞受体和花环试验 由于K细胞在外周血中含量很少
体外检测动物外周血淋巴细胞膜上表面受体的方法。简称花环试验。在外周血液中,T细胞、B细胞和K细胞膜上均具有一种不同的表面受体,据此可以相互区别,并对T细胞和B细胞进行定量检测。
T、B、K淋巴细胞受体和花环试验
由于K细胞在外周血中含量很少,因此花环试验主要用来区别T细胞和B细胞。常用方法有三种。
在T细胞表面具有绵羊红细胞(SRBC)受体,能与绵羊红细胞结合形成以T细胞为中心,周围环绕红细胞如玫瑰花样的细胞集团,简称E花环。凡与红细胞形成花环的淋巴细胞称E花环形成细胞(ERFC)。视试验条件和检测对象不同,又有总E花环和活性花环之分。
总E花环试验(EtR)需经37℃短时间共温后,低速离心,在4℃冰箱2小时才能形成花环。所测的百分率和绝对值可代表被检标本中T细胞的百分率和总数。但常因实验条件和动物个体的差异,所测得的正常范围较宽。畜禽总E花环的百分率:马38~66%,牛32~62%,绵羊28~80%,猪30~46%,鸡45%。马的T细胞缺少绵羊红细胞受体,花环试验需用豚鼠红细胞。
形成活性E花环试验(EaR)的T细胞与红细胞的亲和力较强,不需共温,混合后经低速离心即能迅速形成E花环。这些T细胞中是具有免疫活性的效应T细胞(TE),故活性花环率更能确切地反映机体的细胞免疫水平和动态的变化。
E花环是定量检测T细胞的一项指标,借以判断机体的细胞免疫水平,为临床防治疾病提供依据;并可用以筛选有效的细胞免疫增强剂,作为考核免疫药物疗效的一种指标。
B细胞表面具有IgG Fc受体,可与红细胞(E)抗红细胞抗体(A)复合物结合形成EA花环(图)。将红细胞与相应抗体混合后,加入淋巴细胞悬液,离心取沉淀物涂片观察,凡显示EA花环的细胞即为Fc受体阳性细胞,由此可算出EA花环形成百分率。
EA花环
EA花环试验主要作为定量检测B细胞的方法。但Fc受体并非B细胞所特有,单核细胞、巨噬细胞和嗜中性粒细胞表面也有这种受体,因此计数EA花环时,应注意从形态上剔除其他细胞。
是红细胞(E)、抗红细胞抗体(A)和补体(C)形成花环试验的简称B细胞表面既有IgG Fc受体又有补体C3b受体(K细胞也有C3b受体),因此能与被IgG抗体和补体致敏的红细胞结合,形成EAC花环。
EA和EAC花环试验都是体外检测B细胞和K细胞的方法,借以判断机体的体液免疫状态。如存在体液免疫缺陷,EA和EAC花环形成细胞的百分率显著下降。反之,患自身免疫病和慢性淋巴性白血病时则明显升高。
形成花环的细胞容易沉降,因此可用以从混合的淋巴细胞悬液中分离T细胞和B细胞。
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