用荧光素标记的抗体作探针，在荧光显微镜下，进行抗原的组织学定位技术。荧光素是一种染料，在短波光（紫外光或蓝紫光）的照射下吸收能量而被激发出可见的荧光。常用的荧光素有异硫氰荧光素（FITC）、罗丹明荧光素，包括异硫氰四甲基罗丹明（TMRITC）和丽丝丹罗丹明B₂₀₀（RB₂₀₀）。标本中的抗原被带荧光素的抗体着染后，在荧光显微镜的短波光源激发下，可发出明亮荧光，在黑暗的背景中，极易被检出。

荧光抗体技术主要包括标记、染色和镜检三个步骤。标记方法有搅拌法和透析法两种，搅拌法是将荧光素和被标物按一定浓度、比例混在一起搅拌数小时。透析法是将被标记物装入透析袋内在荧光素溶液内透析标记。标记物需经葡聚糖凝胶G-50层析和DEAE纤维素层析分段以去除游离荧光素及未标记物和标记过多物。常用的染色方法有：①直接染色法。将荧光素标记在抗体上，直接测定相应的抗原，具有方法简便，非特异荧光染色因素少的优点，但敏感性较低，而且一种标记抗体只能测定一种抗原；②间接法。用荧光素标记第二抗体（抗抗体），待抗原与相应抗体反应后，再加标记的抗抗体，因而标记一种抗体可用于多种抗原、抗体系统，敏感性也高于直接法，但因素多，更易出现非特异荧光染色；③补体法。利用抗体—抗原结合后能结合补体的特性，将荧光素标记于抗补体抗体，用以检测组织中的抗原或免疫复合物，也可直接检测组织内补体的沉积。此法敏感性最好，且具有广泛的通用性。然而操作繁琐，易出现非特异性荧光染色，故少用。

荧光抗体技术已广泛用于生物学的各个领域。其应用范围包括：①病原微生物学。可用于细菌、寄生虫和病毒的快速诊断和鉴定、体液抗体的测定，病毒在细胞内的增殖周期及细菌、寄生虫和病毒在组织和细胞内的分布；②免疫学。研究免疫功能的发育及分化、自身免疫病及活淋巴细胞亚群的分离等；③生物学。常用来研究激素、酶、神经介质及其他一些小分子物质在生物体内的合成部位及分布部位、组织和细胞内抗原性物质的示踪、细胞膜抗原和膜受体的观察等。另还可用于肿瘤细胞的抗原变化、肿瘤的病毒病因等方面的研究。（姚火春）

荧光抗体染色法