标准图书状态：现行
标准号：NY/T 548-2015
提出：中华人民共和国农业部
归口：全国动物防疫标准化技术委员会（SAC/TC181）
起草单位：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所
发布：中华人民共和国农业部
发布时间：2015-08
实施时间：2015-08
本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。
本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。本标准代替NY/T548—2002《猪传染性胃肠炎诊断技术》。本标准与NY/T548—2002相比，病原检测部分增加了RT-PCR检测方法。本标准由中华人民共和国农业部提出。本标准由全国动物...
本标准规定了猪传染性胃肠炎的病原学检测和血清学检测。病原学检测包括病毒分离鉴定、直接免疫荧光法、双抗体夹心酶联免疫吸附试验和反转录—聚合酶链式反应。血清学检测包括血清中和试验和间接酶联免疫吸附试验...
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682 分析实验室用水规格和实验方法GB19...
下列术语和定义适用于本文件。
下列缩略语适用于本文件。4.1 CPE：cytopathic effect 细胞病变作用。4.2 DIA：direct Immunofluorescence assay 直接免疫荧光法。4.3 ELISA：enzyme-linked immunosorbent assay 酶联免疫吸附试验。4.4 PBS：phos...
只要实验室诊断中的任何一种方法的结果成立，即可判断该病为猪传染性胃肠炎。
含10%灭活犊牛血清的1640营养液，加100IU/mL青霉素及100μg/mL链霉素，用5.6%碳酸氢钠（NaHCO3）调pH至7.2。如需换液，则血清含量为5%。...
1640培养液中加下列成分，使最终浓度各达到：1%HEPES，1%二甲基亚砜（DMSO），5μg/mL～10μg/mL胰酶（原代肾细胞为）5μg/mL，100IU/mL青霉素、100μg/mL链霉素，以5.6%碳酸氢钠（NaHCO3）调至pH7.2。...
称取0.2385g HEPES溶于100mL无离子水中，用1mol/L氢氧化钠（NaOH）调整pH至7.0～7.2，过滤后置于4℃备用。
称取伊文斯蓝0.1g溶于100mL，0.02mol/L pH7.2 PBS中，4℃保存。使用时，稀释成0.02%浓度。
量取丙三醇90mL，0.02mol/L pH7.2 PBS 10mL，振荡混合均匀即成，4℃保存。
量取50μL吐温-20，加入100mL 0.02mol/L pH7.2磷酸盐缓冲液（见A.1）中。
A.8.1 0.1mol/L碳酸钠液：称取碳酸钠10.6g，加无离子水至1000mL。A.8.2 0.1mol/L碳酸氢钠液：称取碳酸氢钠8.4g，加无离子水至1000mL。A.8.3 量取0.1mol/L碳酸钠液200mL，0.1mol/L碳酸氢钠液700mL，混合即成。...
加0.05%吐温-20及1%明胶的0.02mol/L pH7.2磷酸盐缓冲液。
加0.05%吐温-20，1%明胶及5%灭活牛血清的0.02mol/L pH7.2磷酸盐缓冲液。
A.11.1 pH5.0磷酸盐—柠檬酸缓冲液：称取柠檬酸21.01g，加无离子水至1000mL，量取243mL与0.2mol/L磷酸氢二钠液（见A.1）257mL混合，于4℃冰箱中保存不超过1周。A.11.2 称取40mg邻苯二胺，溶于100mL pH5.0磷酸盐—柠檬...
2mol/L硫酸，量取浓硫酸4mL加入32mL无离子水中混匀。
50×TAE电泳缓冲储存液：三羟甲基氨基甲烷（Tris碱）242g乙二胺四乙酸二钠（Na2EDTA）37.2g双蒸水800mL待上述混合物完全溶解后，加入57.1mL的醋酸充分搅拌溶解，加双蒸水至1L后，置于室温下保存。应用前，用双蒸水将5...
样品检测结果判定见图C.1。图C.1 猪传染性胃肠炎病毒PCR检测结果
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