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猪传染性胃肠炎诊断技术

标准图书状态:现行

标准号:NY/T 548-2015

提出:中华人民共和国农业部

归口:全国动物防疫标准化技术委员会(SAC/TC181)

起草单位:中国农业科学院哈尔滨兽医研究所

发布:中华人民共和国农业部

本标准主要起草人: 冯力 陈建飞 时洪艳 张鑫

发布时间:2015-08

实施时间:2015-08

阅读

    本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。

  • 前言

    本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。本标准代替NY/T548—2002《猪传染性胃肠炎诊断技术》。本标准与NY/T548—2002相比,病原检测部分增加了RT-PCR检测方法。本标准由中华人民共和国农业部提出。本标准由全国动物...

  • 猪传染性胃肠炎诊断技术

  • 1 范围

    本标准规定了猪传染性胃肠炎的病原学检测和血清学检测。病原学检测包括病毒分离鉴定、直接免疫荧光法、双抗体夹心酶联免疫吸附试验和反转录—聚合酶链式反应。血清学检测包括血清中和试验和间接酶联免疫吸附试验...

  • 2 规范性引用文件

    下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682 分析实验室用水规格和实验方法GB19...

  • 3 术语和定义

    下列术语和定义适用于本文件。

  • 4 缩略语

    下列缩略语适用于本文件。4.1 CPE:cytopathic effect 细胞病变作用。4.2 DIA:direct Immunofluorescence assay 直接免疫荧光法。4.3 ELISA:enzyme-linked immunosorbent assay 酶联免疫吸附试验。4.4 PBS:phos...

  • 5 临床诊断

  • 6 实验室诊断

  • 7 结果判定

    只要实验室诊断中的任何一种方法的结果成立,即可判断该病为猪传染性胃肠炎。

  • 附录A(规范性附录) 溶液的配制

  • A.1 0.02mol/L pH7.2磷酸盐缓冲液(PBS)的配制

  • A.2 细胞培养液的配制

    含10%灭活犊牛血清的1640营养液,加100IU/mL青霉素及100μg/mL链霉素,用5.6%碳酸氢钠(NaHCO3)调pH至7.2。如需换液,则血清含量为5%。...

  • A.3 病毒培养液的配制

    1640培养液中加下列成分,使最终浓度各达到:1%HEPES,1%二甲基亚砜(DMSO),5μg/mL~10μg/mL胰酶(原代肾细胞为)5μg/mL,100IU/mL青霉素、100μg/mL链霉素,以5.6%碳酸氢钠(NaHCO3)调至pH7.2。...

  • A.4 HEPES液的配制

    称取0.2385g HEPES溶于100mL无离子水中,用1mol/L氢氧化钠(NaOH)调整pH至7.0~7.2,过滤后置于4℃备用。

  • A.5 0.1%伊文斯蓝原液的配制

    称取伊文斯蓝0.1g溶于100mL,0.02mol/L pH7.2 PBS中,4℃保存。使用时,稀释成0.02%浓度。

  • A.6 磷酸盐缓冲甘油的配制

    量取丙三醇90mL,0.02mol/L pH7.2 PBS 10mL,振荡混合均匀即成,4℃保存。

  • A.7 洗液的配制

    量取50μL吐温-20,加入100mL 0.02mol/L pH7.2磷酸盐缓冲液(见A.1)中。

  • A.8 包被稀释液的配制

    A.8.1 0.1mol/L碳酸钠液:称取碳酸钠10.6g,加无离子水至1000mL。A.8.2 0.1mol/L碳酸氢钠液:称取碳酸氢钠8.4g,加无离子水至1000mL。A.8.3 量取0.1mol/L碳酸钠液200mL,0.1mol/L碳酸氢钠液700mL,混合即成。...

  • A.9 样品稀释液的配制

    加0.05%吐温-20及1%明胶的0.02mol/L pH7.2磷酸盐缓冲液。

  • A.10 酶标抗体稀释液的配制

    加0.05%吐温-20,1%明胶及5%灭活牛血清的0.02mol/L pH7.2磷酸盐缓冲液。

  • A.11 底物溶液的配制

    A.11.1 pH5.0磷酸盐—柠檬酸缓冲液:称取柠檬酸21.01g,加无离子水至1000mL,量取243mL与0.2mol/L磷酸氢二钠液(见A.1)257mL混合,于4℃冰箱中保存不超过1周。A.11.2 称取40mg邻苯二胺,溶于100mL pH5.0磷酸盐—柠檬...

  • A.12 终止液的配制

    2mol/L硫酸,量取浓硫酸4mL加入32mL无离子水中混匀。

  • 附录B(规范性附录) TAE电泳缓冲液(pH约 8.5)的配制

    50×TAE电泳缓冲储存液:三羟甲基氨基甲烷(Tris碱)242g乙二胺四乙酸二钠(Na2EDTA)37.2g双蒸水800mL待上述混合物完全溶解后,加入57.1mL的醋酸充分搅拌溶解,加双蒸水至1L后,置于室温下保存。应用前,用双蒸水将5...

  • 附录C(规范性附录) 样品检测结果判定图

    样品检测结果判定见图C.1。图C.1 猪传染性胃肠炎病毒PCR检测结果