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中华人民共和国 农业行业标准 甘蔗白色条纹病菌检验检疫技术规程 实时荧光定量PCR法

标准图书状态:现行

标准号:NY/T 2743-2015

提出:由农业部种植业管理司

归口:全国植物检疫标准化技术委员会(SAC/TC271)

起草单位:农业部福建甘蔗生物学与遗传育种重点实验室,农业部甘蔗及制品质量监督检验测试中心,国家甘蔗工程技术研究中心

发布:中华人民共和国农业部

本标准主要起草人: 许莉萍。王恒波。阙友雄。黄国强。郭晋隆。苏亚春

发布时间:2015-08

实施时间:2015-08

阅读

    本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。

  • 前言

    本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。本标准由农业部种植业管理司提出。本标准由全国植物检疫标准化技术委员会(SAC/TC271)归口。本标准起草单位:农业部福建甘蔗生物学与遗传育种重点实验室、农业部甘蔗及制...

  • 甘蔗白色条纹病菌检验检疫技术规程 实时荧光定量PCR法

  • 1 范围

    本标准规定了甘蔗白色条纹病菌实时荧光定量PCR检测方法。本标准适用于甘蔗种茎、种苗以及甘蔗或其他植物组织中的甘蔗白色条纹病菌(Xanthomonas albilineans)的检验检疫与检测。本标准中PCR等缩略语参见附录A。...

  • 2 规范性引用文件

    下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682 分析实验室用水规格和试验方法GB/T...

  • 3 术语和定义

    下列术语和定义适用于本文件。

  • 4 原理

    利用荧光信号伴随着目标序列PCR扩增产物的增加而增强的原理,通过收集PCR扩增过程的荧光信号值,即可判断试样是否带有目标序列。为此,在克隆甘蔗白色条纹病菌特异性致病基因hrpB全长序列基础上,根据序列信息设...

  • 5 试剂

    除非另有规定,在分析中仅使用分析纯试剂,实验用水符合GB/T6682的二级水指标,其中涉及PCR的用水要求达到一级水指标。5.1 氢氧化钠(10mol/L)溶液:在160mL水中加入80g NaOH,溶解后加水定容至200mL,塑料瓶中保存...

  • 6 仪器设备

    6.1 实时荧光定量PCR扩增仪:激发/检测波长范围350nm~750nm;可用探针SYBR Green Ⅰ染料和TaqMan探针;升降温速度≥2.0℃/s;均一性+/-0.5℃;准确性+/-0.3℃;温度范围4℃~100℃。6.2 电泳仪:输出类型为恒压/恒流/恒功率...

  • 7 样品的采集与前处理

  • 8 操作方法

  • 附录A(资料性附录) 缩略语

    下列缩略语适用于本文件。A.1 PCR:聚合酶链式反应(polymerase chain reaction)。A.2 Ct值:每个反应管内的荧光信号达到设定的阈值时所经历的循环数。A.3 Taq酶:Taq DNA聚合酶。A.4 Tris:三(羟甲基)氨基甲烷[Tri...

  • 附录B(资料性附录) 甘蔗白色条纹病菌有关信息

  • B.1 甘蔗白色条纹病菌基本信息

    由黄单胞杆菌属的甘蔗白色条纹病菌[Xanthomonas albilineans(Ashby 1929)Dowson 1943]引致的甘蔗白色条纹病(leaf scald)是重要的世界性甘蔗细菌性病害,为系统性维管束侵染病害,受感染植株发病后导致失水萎...

  • B.2 甘蔗白色条纹病菌hrpB基因实时荧光定量PCR检测产物的序列信息

    1 CTGGTACTGC ACCTGCTCTC GCCCGGCGGA CGCCCACTGC AAGTCACCCA AGACCTGCGC6 1AACTTCTGGT CCAACACTTA CCCGGAAG注:划线部分为引物和探针序列。...