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动物衣原体病诊断技术

标准图书状态:现行

标准号:NY/T 562-2015

提出:中华人民共和国农业部

归口:全国动物防疫标准化技术委员会(SAC/TC181)

起草单位:中国农业科学院兰州兽医研究所

发布:中华人民共和国农业部

本标准主要起草人: 周继章 曹小安 宫晓炜 陈启伟 郑福英 李兆才 邱昌庆

发布时间:2015-08

实施时间:2015-08

阅读

    本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。

  • 前言

    本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。本标准代替NY/T562—2002《动物衣原体病诊断技术》。本标准与NY/T562—2002相比,病原检测部分增加了血清学诊断技术和PCR诊断技术。本标准由中华人民共和国农业部提出。本标...

  • 动物衣原体病诊断技术

  • 1 范围

    本标准规定了动物衣原体鸡胚分离与传代培养技术、血清学诊断技术及PCR诊断技术。本标准适用于实验室动物衣原体的分离、传代培养和动物衣原体病的诊断。其中,血清学直接补体结合试验(Direct Complement Fixatio...

  • 2 术语和定义

    下列术语和定义适用于本文件。

  • 3 动物衣原体的分离与培养

  • 4 动物衣原体病的PCR诊断

  • 5 动物衣原体病血清学诊断技术

  • 附录A(规范性附录) 姬姆萨染色方法

    A.1 以1g的姬姆色素染料加入66mL甘油,混匀,60℃保温溶解2h,再加入66mL甲醇混匀,即配成姬姆色素原液。此原液用前用PBS(6.8)稀释10倍左右就可以使用。A.2 按常规方法制备血涂片,待血膜干后,用甲醇固定2min~3min...

  • 附录B(规范性附录) PCR结果判定示意图

    PCR结果判定示意图见图B.1。图B.1 PCR结果判定示意图

  • 附录C(规范性附录) 补体效价滴定

    C.1 用生理盐水将补体做1:60稀释。C.2 敏化红细胞:1%红细胞悬液加等量的2个工作单位量的溶血素,37℃水浴15min。C.3 按表C.1测定补体效价。表C.1 补体效价测定C.4 以能完全溶血的最小补体量为一个单位,正式试验...

  • 附录D(规范性附录) 溶血素效价滴定

    D.1 先将溶血素1:100稀释(0.2mL含甘油的溶血素加9.8mL生理盐水),按.1稀释成不同倍数。表D.1 溶血素稀释D.2 再按表D.2操作,测定溶血素效价。表D.2 溶血素效价测定D.3 以完全溶血的溶血素最高稀释倍数为一个溶...

  • 附录E(规范性附录) 1%绵羊红细胞悬液的制备

    E.1 从成年健康公绵羊颈静脉采血于灭菌的装有玻璃珠的三角烧瓶中,均匀摇动脱去纤维蛋白,按1:1(V/V)加入红细胞保存液,混匀后分装于灭菌链霉素瓶中(5mL~10mL),4℃冰箱可保存2个月。使用时,将红细胞移入离心管,...

  • 附录F(资料性附录) 各种畜禽血清灭能温度和时间

    不同畜禽血清灭能温度和时间见表F.1。未注明者,血清的灭能温度同时适应于本标准的CF和IHA试验。表F.1 不同畜禽血清灭能温度和时间...

  • 附录G(规范性附录) 抗原、阳性血清效价滴定方法

  • G.1 测定抗原、血清效价

    G.1.1 取80支试管,排成纵横各9排的方阵(第9排缺1管)。G.1.2 抗原和阳性血清分别从1:8~512做倍比稀释,阴性血清做1:4稀释。设抗原、血清和生理盐水对照。G.1.3 按表G.1加阳性血清,每个稀释度加7管,每管加0.1mL。抗...

  • G.2 指示血清

    间接补体结合试验所用的指示血清,即直接补体结合试验中的阳性对照血清。其效价如G.1中所测,间接补体结合正式试验时,采用一个血清工作量。...

  • G.3 间接补体结合试验用阳性血清对照效价的滴定

    G.3.1 先将间接补体结合试验用阳性血清对照(鸭或猪的免疫血清),用生理盐水从1:4至1:512做倍比稀释。抗原和指示血清均稀释成一个工作量,按表G.2程序进行滴定。G.3.2 效价判定:能与一个工作量抗原呈现完全溶血...

  • 附录H(规范性附录) 含1%灭能健康兔血清0.15mol/L pH 7.2 PBS稀释液的配制方法

  • H.1 0.15mol/L pH 7.2 PBS配制

    磷酸氢二钠(Na2HPO4·12H2O)19.34g磷酸二氢钾2.86g氯化钠4.25g蒸馏水加至500mL103.41kPa 30min灭菌。

  • H.2 健康兔血清

    灭能。

  • H.3 含1%灭能健康兔血清0.15mol/L pH 7.2 PBS稀释液的配制

    0.15mol/L pH 7.2 PBS99mL灭能健康兔血清1mL二者混合,即为含1%灭能健康血清0.15mol/L pH 7.2 PBS稀释液。