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禽支原体PCR检测方法

标准图书状态:现行

标准号:NY/T 553-2015

提出:中华人民共和国农业部

归口:全国动物防疫标准化技术委员会(SAC/TC181)

起草单位:中国动物卫生与流行病学中心

发布:中华人民共和国农业部

本标准主要起草人: 王娟 李卫华 王玉东 黄秀梅 龚振华 郭福生

发布时间:2015-08

实施时间:2015-08

阅读

    本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。

  • 前言

    本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。本标准代替NY/T553—2002《禽支原体病诊断技术》。本标准与NY/T553—2002相比,删除了血清凝集实验,选取了PCR方法检测鸡毒支原体和滑液囊支原体。本标准由中华人民共和国农...

  • 禽支原体PCR检测方法

  • 1 范围

    本标准规定了禽支原体PCR(聚合酶链式反应)的检测技术要求。本标准适用于禽支原体病的流行病学调查和辅助性诊断。...

  • 2 缩略语

    下列缩略语适用于本文件。MG:mycoplasma gallisepticum 鸡毒支原体。MS:mycoplasma synoviae 滑液囊支原体。PBS:phosphate buffered solution 磷酸盐缓冲液。...

  • 3 实验室设备要求

  • 4 相关试剂

  • 5 操作程序

  • 6 结果判定

    阳性对照出现相应大小的扩增条带,且阴性对照无此扩增带时,判定检测有效;否则判定检测结果无效,不能进行判断。MG的PCR产物为185bp。如果在阳性对照出现185bp扩增带,阴性对照无带出现(引物二聚体除外)时,试验成...

  • 附录A(规范性附录) 相关试剂的配制

  • A.1 1.5%琼脂糖凝胶的配制

    琼脂糖1.5g0.5×TAE电泳缓冲液加至100mL微波炉中完全融化,待冷至50℃~60℃时,加入溴乙锭(EB)溶液5μL,摇匀,倒入电泳板上,凝固后取下梳子,备用。...

  • A.2 1×TAE缓冲液的配制

  • A.3 溴乙锭(10 μL)的配制

    溴乙锭20mg灭菌双蒸水加至20mL

  • A.4 10×加样缓冲液

    聚蔗糖25g灭菌双蒸水100mL溴酚蓝0.1g二甲苯青0.1g

  • 附录B(规范性附录) PBS溶液的配制

    PBS溶液的配制如下:NaCl3.9gNa2HPO4·12H2O0.2gKH2PO40.2g双蒸馏水加至1000mL

  • 附录C(规范性附录) PCR产物大小对照

    PCR产物大小对照见图C.1。图C.1 PCR产物大小对照